溴化氰活化瓊脂糖凝膠配體偶聯(lián)的操作過程太精彩
信帆生物提供的溴化氰活化4B/6B瓊脂糖凝膠是一種活化中間體填料，它是通過溴化氰和瓊脂糖上面的羥基反應(yīng)生成活化的氰酸酯基團(tuán)。蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸等可以偶聯(lián)到溴化氰活化4B/6B瓊脂糖凝膠上。
產(chǎn)品的優(yōu)點：
偶聯(lián)條件溫和，效率高；可偶聯(lián)含有氨基的配體，應(yīng)用范圍廣。
產(chǎn)品指標(biāo)
產(chǎn)品牌號 | 溴化氰活化4B瓊脂糖凝膠 | 溴化氰活化6B瓊脂糖凝膠 |
基質(zhì) | seplite 4B | seplite 6B |
顆粒大小 | 平均粒徑90μm（50-160μm） | |
偶聯(lián)能力 | 20~60mgα-胰凝乳蛋白酶原/ml凝膠 | |
線性流量 | 75cm/h（25℃），直徑1.6cm色譜柱，5cm柱床高 | |
高溫高壓 | 不耐受 | |
pH穩(wěn)定性 | 2–11 | |
化學(xué)穩(wěn)定性 | 常見溶液中可以保持穩(wěn)定。可以耐受非離子型去污劑、變性溶劑，如8 M尿素和6 M鹽酸胍。也可以耐受50%二甲基甲酰胺和50%二氧六環(huán)等有機(jī)溶劑。 | |
保存 | 2~8℃ | |
一般配體偶聯(lián)的過程如下：
（1）將所需要偶聯(lián)的配基溶解到 pH 8.3含有0.5mol/LNaCl的0.1mol/LNaHCO3 緩沖溶液中，加入溶脹好的溴化氰活化4B/6B瓊脂糖凝膠。
（2）在室溫中攪拌反應(yīng)2~4小時或者在4℃下過夜反應(yīng)。
（3）反應(yīng)*后，用5倍反應(yīng)體積的偶聯(lián)緩沖液洗滌掉其中多余的配體，10倍體積的水洗。
（4）將反應(yīng)完洗滌過的凝膠懸浮到水中，加入乙醇胺（1mol/L）或者pH8.0的Tris-HCl緩沖液，在常溫下至少攪拌反應(yīng)2小時，以消除殘余活性基團(tuán)。
（5）用含有0.5mol/LNaCl的0.1mol/L醋酸鹽緩沖液（PH 4.0）和含有0.5mol/LNaCl的0.1mol/L Tris-HCl緩沖液（PH 8）交替洗滌，至少重復(fù)以上循環(huán)洗滌3次。用10倍柱體積的PBS洗滌。
瓊脂糖凝膠是依靠糖鏈之間的次級鏈如氫鍵來維持網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的疏密依靠瓊脂糖的濃度。一般情況下，它的結(jié)構(gòu)是穩(wěn)定的，可以在許多條件下使用（如水，pH4-9范圍內(nèi)的鹽溶液）。瓊脂糖凝膠在40℃以上開始融化，也不能高壓消毒，可用化學(xué)滅菌活處理。
作用：
制成的小顆粒用于凝膠過濾。適于用sephadex不能分級分離的大分子的凝膠過濾，若使用5%以下濃度的凝膠，也能夠分級分離細(xì)胞顆粒、病毒等。利用其吸附性小的特點，有時用它代替瓊脂、以作為免疫電泳或凝膠內(nèi)沉降反應(yīng)的支持物。
信帆生物-溴化氰活化瓊脂糖凝膠4B偶聯(lián)條件溫和，效率高應(yīng)用范圍廣。
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